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直擊,小鼠飼養(yǎng)細胞制備
更新時間:2019-10-28   點擊次數(shù):1390次

生物科研這件事真的是微妙微翹,有太多種變化,太多種可能發(fā)生。比如說在細胞融合后選擇性培養(yǎng)的過程中,就會有大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡,此時單個或少數(shù)分散的雜交瘤細胞多半不易存活,通常必須加入其它活細胞使之繁殖。而這種被加入的活細胞稱之為飼養(yǎng)細胞(Feeder Cells)。飼養(yǎng)細胞促進其他細胞增殖的機制尚不明了,一般認為它們可能釋放非種屬特異性的生長ci激因子,為雜交瘤細胞提供必要的生長條件;也可能是為了滿足新生的雜交瘤對細胞密度的依賴性。在常用的飼養(yǎng)細胞中有胸腺細胞、正常脾細胞和腹水巨噬細胞。其中小鼠的腹腔巨噬細胞來源及制備較為方便,且有吞噬清除死亡細胞的作用,因此使用為方便。

 

下面就讓上海晶抗生物科技有限公司帶您去看看制備方法:

 

1、小鼠(一般選取經(jīng)產(chǎn)母鼠)脫頸椎致死,注意斷頸椎時盡量減少對腹腔的壓迫,避免損傷腹腔內(nèi)血管,以防飼養(yǎng)細胞內(nèi)含有大量血細胞。

 

2、將小鼠浸泡于75%酒精中5min,然后手提住小鼠尾巴,上下于酒精中涮洗數(shù)次。置于超凈臺無菌平皿中。

 

3、用無菌剪鑷從后腹剪開皮膚,沿兩側(cè)剪開皮膚,暴露腹部,注意不要損傷腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜。

 

4、用注射器吸取6-8ml的不*培養(yǎng)基注射入腹腔,注意注射時用鑷子提起腹膜,避免針頭刺到腸管等腹腔臟器。

 

5、用棉球輕輕an摩腹部1min,吸出注入的培養(yǎng)液。

 

6、800-1000 r/min離心5-10 min,棄去上清。若腹腔血管損傷,沉淀中可見有紅細胞。

 

7、用5ml HAT培養(yǎng)基懸浮細胞,根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果,補加HAT培養(yǎng)基,使細胞濃度達2×105/ml。(一般情況下一只經(jīng)產(chǎn)母鼠可鋪2-3塊96孔板。)

通常對巨噬細胞來說,96孔板每孔需要2×104個細胞,24孔板需105個細胞。每只小鼠可采~5×106個細胞,因此一只小鼠可供兩塊96孔板飼養(yǎng)細胞。

 

8、將上述細胞懸液加入96孔板,每孔0.1ml,37℃,6% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

 

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